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雙抗夾心法實驗操作注意事項

日期:2025-02-04 17:40
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摘要: 雙抗夾心法實驗操作注意事項: 1、樣品稀釋: (1)稀釋血清避免假陽性的發(fā)生(把蛋白按照一定的倍數(shù)稀釋,如10倍、20倍,將抗原進行稀釋包被反應;用稀釋好的陽性參閱血清和陰性參閱血清進行孵育后洗刷,加入酶結合物進行反應,孵育洗滌,加入底物顯色,停止反應后分別測定O.D值,O.D值≥1.0的抗原稀釋度為適合的包被濃度。陰性參閱血清O.D值<0.1-0.2。這樣陽性參閱血清和陰性參閱血清的O.D值就會有明顯差別)。 (2)粉末型樣本需要短暫離心,如沾到管蓋、管壁需要將標準品沉入管底...

雙抗夾心法實驗操作注意事項:

1、樣品稀釋:

(1)稀釋血清避免假陽性的發(fā)生(把蛋白按照一定的倍數(shù)稀釋,如10倍、20倍,將抗原進行稀釋包被反應;用稀釋好的陽性參閱血清和陰性參閱血清進行孵育后洗刷,加入酶結合物進行反應,孵育洗滌,加入底物顯色,停止反應后分別測定O.D值,O.D值≥1.0的抗原稀釋度為適合的包被濃度。陰性參閱血清O.D值<0.1-0.2。這樣陽性參閱血清和陰性參閱血清的O.D值就會有明顯差別)。

(2)粉末型樣本需要短暫離心,如沾到管蓋、管壁需要將標準品沉入管底;加入蒸餾水時需短暫輕柔渦旋,靜置10-30min,充分溶解。

(3)加水后等待充分溶解后可選擇吸吹或渦旋混勻。

2、試劑平衡:

(1)所有的試劑和樣本需平衡至室溫5-10min,避免產(chǎn)生動力學反應差異這會影響準確性。

3、混勻:

(1)稀釋前、后的樣品需進行搖床充分混勻。

4、加樣操作:

(1)定期校準移液搶。

(2)加樣前需混勻,避免加入到孔壁上,盡可能避免氣泡產(chǎn)生。

(3)避免樣本濺出(可用吸水紙吸取濺出液體)。

(4)避免加樣槍頭反復吸取導致樣本污染。

(5)加樣操作按照說明書的順序來進行,確保顯色時間一致。

5、孵育:

(1)震蕩孵育,加快抗原抗體之間的相互接觸,使反應更加充分。

(2)水浴溫度保持37℃。

(3)水浴需要封閉防止污染。

6、洗板:

(1)洗液盡量不要溢出孔外。

(2)拍過酶標記物后及時更換吸水紙,避免影響實驗的準確性。

(3)手工洗板時拍板要垂直且用力不能過猛,可避免交叉污染。

(4)扣干后的酶標板應快速加液,避免干板太久。

(5)采用全自動時需檢查各項水瓶是否充足。

(6)采用全自動時檢查是否堵塞。

7、顯色:

(1)顯色需控制好時間(根據(jù)說明書操作),時間過短,結果偏低;時間過長,空白增高/非特異性顯色增加。

(2)顯色呈梯度。

8、比色:

(1)跟換濾光片時注意錯用的可能性。

9、檢測:

(1)酶標儀使用前預熱10-15min,結果更穩(wěn)定。

(2)雙波長測定吸光值,可以減少指紋、雜質等帶來的誤差(檢測波長450nm-參考波長630nm(570nm))。

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